研究论文/Research Article

大肠杆菌表达的重组琼胶酶包涵体的纯化与复性条件研究  

郭帅 , 陈梦仟 , 朱新术 , 周晨妍 , 王燕
河南省高校合成生物学改造工程与应用重点实验室, 新乡医学院生命科学技术学院, 新乡, 453003
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2018 年, 第 37 卷, 第 41 篇   
收稿日期: 2017年01月17日    接受日期: 2017年03月11日    发表日期: 2018年04月16日
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摘要

琼胶酶(agarase)是一类能够降解琼脂糖的糖苷水解酶,在保健食品、医药、化妆品等行业极具应用价值。本研究旨在纯化大肠杆菌BL21(DE3)plySs表达的以包涵体状态存在的重组琼胶酶rAga0917,并对纯化的包涵体蛋白的复性条件进行优化,以获得大量高活性的琼胶酶蛋白。用单因素实验,每次以单一复性条件为变量,用透析复性法探索了初始蛋白浓度、透析时间、温度、非离子去垢剂Triton X-100、甘油等对重组琼胶酶rAga0917包涵体复性的影响。实验结果显示,通过Ni2+柱亲和层析,获得了纯度95%以上的蛋白。纯化蛋白浓度低于65 μg/ml时,复性蛋白的酶活性与初始蛋白浓度成正比;4 °C复性的蛋白,其琼胶酶活性明显高于25 °C;随着透析时间的增长,复性效果越来越好;实验还同时发现复性液中的甘油能有效地辅助重组琼胶酶rAga0917复性。

关键词
琼胶酶;包涵体;纯化;复性;酶活力

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基因组学与应用生物学
• 第 37 卷
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