李阿英 , 刘洪 , 李晓颖 , 郭磊 , 宋长年

南京农业大学园艺学院, 南京, 210095
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2012 年, 第 31卷, 第 38 篇   
收稿日期: 2012年04月10日    接受日期: 2012年04月30日

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利用生物信息学方法以拟南芥SCL6和杨树GRAS cDNA 序列作为模板，对柑橘EST数据库进行同源检索筛选出柑橘SCL6和GRAS基因的cDNA序列，并以枳[Poncirus trifoliata (L.) Raf.]花cDNA为模板，根据以上cDNA序列设计5’末端和3’末端扩增的特异引物，利用5’ RACE和3’ RACE技术，分别获得该基因的5’和3’末端，序列拼接后获得枳的SCL6和GRAS cDNA全长。分别命名Pt-SCL6和Pt-GRAS，大小分别是2 668 bp 和1 911 bp，在GenBank的登录号分别是GQ505957和GU072592，其分别编码706个和636个氨基酸全长。生物信息学分析表明Pt-SCL6和Pt-GRAS的cDNA序列中分别有microRNA171 (miR171) 和miR1446的识别位点，其与其它植物的GRAS一样有着高度保守的序列即GRAS结构域。构建Pt-SCL6和Pt-GRAS亚细胞定位载体35S-GW-GFP- GQ505957/ GU072592，基因枪转化洋葱表皮细胞，暗培养24 h后激光共聚焦显微镜下观察。亚细胞定位结果表明Pt-SCL6和Pt-GRAS均定位于细胞膜中。转录因子Pt-SCL6和Pt-GRAS表现出在细胞膜区域定位的现象。

枳；Pt-SCL6和Pt-GRAS；基因克隆；亚细胞定位