邝翡婷^1,2 , 袁定阳² , 李莉² , 李新奇²

1中南大学研究生院, 长沙, 410125;
2湖南杂交水稻研究中心杂交水稻国家重点实验室, 长沙, 410125
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2012 年, 第 31卷, 第 85 篇   
收稿日期: 2012年08月17日    接受日期: 2012年10月10日

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介绍一种多目的片段一步重组克隆的载体构建的新方法。该方法要求在PCR引物设计时，在第一个目的片段上游引物的5’端和最后一个目的片段下游引物的5’端各设置16 bp与线性化目标载体末端同源的序列，再在各目的片段之间的引物上各设计25 bp的重叠序列，以便进行融合PCR将多片段扩增成融合片段。此方法将融合片段与线性化骨架载体进行一步重组、转化和重组子鉴定。该方法只要求骨架载体上有一个特异性酶切位点，特别适用于插入片段中含有较多限制性酶切位点的载体构建；该方法还可以引入定点突变，可便捷构建分析启动子功能等需引入定点突变的载体；该构建方法还可以实现多基因的无缝融合构建多顺反子，在构建原核基因表达载体、叶绿体表达载体、线粒体表达载体方面有着明显优势。本研究以水稻胚乳特异性表达载体P_Gt1-mGFP-pSB130为例，介绍此载体构建方法。

重组融合PCR；载体构建；定点突变；原核表达载体