韦淑亚¹ , 张莹莹¹ , 赵旭东¹ , 刘小东¹ , 罗青晨¹ , 卫秋慧¹ , 陈鹏² , 何光源¹ , 杨广笑¹

1 科技部国际科技合作基地(基因工程)，分子生物物理学教育部重点实验室，华中科技大学生命科学与技术学院，武汉，430074
2 广西大学农学院，南宁， 530004
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2013 年, 第 32卷, 第 95 篇   
收稿日期: 2013年07月17日    接受日期: 2013年08月09日

水稻钙依赖型蛋白激酶OsCPK9是一个响应逆境胁迫并在植物发育过程中起重要作用的蛋白激酶。我们采用RT-PCR从水稻品种日本晴（Oryza sativa L. cv. Nipponbare）中克隆了OsCPK9基因靠近翻译起始位点下游的一段280 bp的特异片段。将该片段以正、反向分别连接到来源于小麦TAK14基因的548 bp内含子片段（NCBI Accession AF325198）两侧，从而获得pSK-OsCPK9-RNAi的中间表达载体。进而将其克隆到植物双元表达载体pCAMBIA1301中，构建shRNAi表达载体pCAMBIA-OsCPK9-RNAi。经酶切和测序鉴定正确后，利用农杆菌介导转化水稻。通过抗性筛选和标记基因hyg和gus进行 PCR鉴定，筛选到20株转基因水稻植株,实时荧光定量PCR分析显示，部分转基因植株OsCPK9的表达受到显著抑制。

OsCPK9；水稻；RNAi；CDPK；遗传转化