黄夕洋 , 唐辉 , 孔德鑫 , 王满莲 , 史艳财 , 邹蓉

广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所, 桂林, 541006
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2013 年, 第 32卷, 第 75 篇   
收稿日期: 2013年05月09日    接受日期: 2013年05月23日

了探讨广西甜茶ISSR实验中的多种因素对实验结果的影响，采用单因素法对PCR反应体系中的5个潜在因素(Mg²⁺, dNTP, 引物, Taq酶和模板DNA)在5水平上进行优化实验，并进一步优化了反应程序中的退火温度和循环次数。结果表明：25 μL的最佳反应体系为，1×PCR Buffer、MgCl₂ 2.0 mmol/L、dNTP 0.2 mmol/L、引物0.8 µmol/L、Taq DNA聚合酶0.75 U、模板DNA 80 ng；最佳反应程序为：在94℃下进行3 min预变性；随后循环扩增35次(包括94℃变性1 min,54℃退火1 min,72℃延伸1 min)；最后在72℃下延伸10 min。本研究建立的广西甜茶的最佳ISSR-PCR反应条件为进一步进行遗传多样性研究奠定了基础。

广西甜茶；ISSR；反应条件； 单因素优化