何凤祥^1，2 , 李薇¹ , Abebe Jenberie Wubie^1，3 , 薛菲¹ , 国占宝¹ , 周婷¹ , 徐书法¹

1 中国农业科学院蜜蜂研究所，农业部授粉昆虫生物学重点实验室，北京，100093
2 中牧智合(北京)生物技术有限公司，北京，100070
3 Sekota Dry land Agricultural Research Center, Institute of Amhara Agricultural Research, Amhara Region, Sekota, 62, Ethiopia
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2013 年, 第 32卷, 第 116 篇   
收稿日期: 2013年09月03日    接受日期: 2013年09月26日

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为建立高效稳定的蜜蜂球囊菌（Ascosphaera apis）遗传转化体系，构建具有不同表型特征的球囊菌转化子，本实验对影响蜜蜂球囊菌菌株原生质体制备及再生的因子进行了系统的研究，同时对蜜蜂球囊菌原生质体的释放及再生过程进行了显微观察。结果表明，采用液体培养基进行24h培养的蜜蜂球囊菌菌体，在28℃条件下，应用50mg mL^-1 的崩溃酶，经4 h酶解所制备的原生质体释放量最大，达到34.00×10⁵ mL^-1。在上述条件下，采用0.8M柠檬酸与NaCl的混合液作为稳渗剂，原生质体的再生率也较高，达到53.06%。蜜蜂球囊菌以菌丝断裂方式释放原生质体，原生质体再生时表现为原生质体先是突出，其后延长，并最终发育成为正常菌丝。本实验首次优化了蜜蜂球囊菌原生质体制备实验流程及原生质体再生最佳条件，为深入研究蜜蜂球囊菌的致病机理及寻找蜜蜂球囊菌致病相关基因奠定基础。

蜜蜂球囊菌；原生质体制备；原生质体再生；酶解