卢业飞 , 吴柳 , 秦秀林 , 冯家勋 , 刘君梁

亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室, 广西大学生命科学与技术学院, 南宁, 530005
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2013 年, 第 32卷, 第 97 篇   
收稿日期: 2013年04月03日    接受日期: 2013年05月15日

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本研究从哈茨木霉(Trichoderma harzianum)A25-2总RNA中利用RT-PCR的方法扩增到其纤维二糖水解酶I基因的cDNA序列，并对该基因编码的氨基酸序列进行分析，得到cbh I基因中编码催化功能域的序列。将催化功能域编码序列克隆到表达载体pCP-GH中，用PEG-CaCl₂介导的原生质体转化方法将重组质粒转化到绿色木霉(Trichoderma viride)HP35-3中，筛选得到12个转化子。以p-NPC为底物，测定了该12个转化子的酶活力，获得比活力最高的转化子Tv/CD_Hl-CBM-5，其纤维二糖水解酶活力是HP35-3的3.8倍。SDS-PAGE分析表明，绿色木霉表达了导入的含A25-2纤维二糖水解酶I催化功能域的编码序列。

哈茨木霉；纤维二糖水解酶；绿色木霉； 原生质体；催化功能域；转化