韦旭钦¹ , 陈云来¹ , 吴杰群¹ , 韦宇拓¹ , 杜丽琴¹ , 黄日波^1,2

1 广西大学生命科学与技术学院，广西亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁,530004
2 广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心，南宁，530007
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2013 年, 第 32卷, 第 117 篇   
收稿日期: 2013年07月02日    接受日期: 2013年08月20日

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通过特定的引物，以土壤宏基因组DNA为模板，采用PCR技术扩增获得3.3 kb的DNA片段，该片段连接于pSE380载体构建重组质粒pSE380-dhaB12用于测序和表达。序列分析表明，该DNA片段编码的氨基酸序列与已报导的丁酸梭菌不依赖辅酶B₁₂甘油脱水酶的相似性达99%。通过IPTG诱导，dhaB12基因在大肠杆菌中表达成功，SDS-PAGE分析表明有88 kD和34 kD两条蛋白质条带，在没有辅酶B₁₂存在的情况下，所表达的酶具有明显的甘油脱水酶活性。

宏基因组；不依赖辅酶B12；甘油脱水酶；筛选；表达