谢柳 , 张文飞 , 刘卓明 , 蔡玉根 , 李有志 , 方宣钧

1. 广西大学生命科学与技术学院, 南宁, 530005
2. 海南省农作物分子育种重点实验室, 三亚, 572025
3. 海南省热带农业资源研究所, 三亚, 572025
4. 浙江嘉兴市蚕种场, 嘉兴, 314000
* 同等贡献作者
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2011 年, 第 30卷, 第 4 篇   doi: 10.5376/gab.cn.2011.30.0004
收稿日期: 2011年01月08日    接受日期: 2011年01月18日    发表日期: 2011年01月30日

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推荐引用：

引用格式(中文)：
谢柳等,2011, 从僵死家蚕中分离的高毒力Bt菌株W015-1的特征及其cry1Ac22基因鉴定,基因组学与应用生物学(online),Vol.30 No.4 pp.1016-1025 (doi: 10.5376/gab.cn.2011.30.0004)
引用格式(英文)：
Xie et al., 2010, Characterization of a new highly toxic isolate of Bacillus thuringiensis from the Diapausing Larvae of silkworm and identification of cry1A22 gene, Bt Research Vol 1 No 1 (doi: 10.5376/bt.2010.01.0001)

 

 

我们从浙江省杭嘉湖地区收集了100份滞育僵死家蚕的幼蚕，解剖这些僵死的幼蚕的肠道，从中肠中分离出240份芽孢杆菌，从中鉴定出6株苏云金芽孢杆菌。经过小菜蛾生物测定获得一株高毒力的苏云金芽孢杆菌(Bt)菌株W015-1，菌株编号20050509W015。扫描电镜观察显示该菌株在形成芽孢的同时高产菱形晶体蛋白，SDS-PAGE分析表明，该蛋白约为130 kD的杀虫晶体蛋白。本研究采用脉冲场电泳(pulsed field gel elecctrophoresis, PFGE)用来分析Bt菌株W015-1的大质粒，结果表明Bt W015-1的大质粒的数量、大小及带型谱和Bt模式菌株HD73的几乎没有差异，但与HD1和Bti则有明显的不同。采取了PCR-RFLP方法鉴定W015-1菌株的cry基因型，结果显示与标准菌株HD73的cry1Ac基因型有明显的酶切位点的差异。采用PCR-RFLP结合反向PCR方法克隆了编码该杀虫晶体蛋白的基因。序列分析表明该基因编码序列为3 537 bp，编码1 178个氨基酸残基的蛋白质(accession number EU282379)。和已经克隆的cry1Ac1基因氨基酸序列相似性最高，在233 (T/R)、448 (M/I)和1158 (K/E)3个位点和cry1AC1不同，该cry1Ac基因已经被Bacillus thuringiensis毒素命名委员会正式命名为cry1Ac22。将cry1Ac22基因编码序列克隆到表达载体pQE30，转入大肠杆菌M15中能够表达130 kD的蛋白，表达蛋白进行生物测定表明Cry1Ac22蛋白对鳞翅目昆虫小菜蛾(Plutella xylostella)很高的杀虫活性。鉴于Bt W015-1在质粒谱、Cry基因酶切位点、毒性蛋白产量及对鳞翅目的杀虫活性等方面的不同，我们认为Bt W015-1可用作以Btk菌株为基础的生物杀虫农药的替代菌株。

家蚕；苏云金芽孢杆菌；伴孢晶体毒蛋白；质粒谱；Cry基因型；cry1Ac22基因；杀虫活性