赵立仕 , 李财新 , 田亮 , 张文飞 , 谢柳 , 李有志 , 方宣钧

1. 广西大学生命科学与技术学院, 南宁, 530005
2. 海南省农作物分子育种重点实验室, 三亚, 572025
3. 海南省热带农业资源研究所, 三亚, 572025
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2011 年, 第 30卷, 第 5 篇   doi: 10.5376/gab.cn.2011.30.0005
收稿日期: 2010年12月22日    接受日期: 2011年01月25日    发表日期: 2011年01月30日

这是一篇采用Creative Commons Attribution License进行授权的开放取阅论文。只要对本原作有恰当的引用，版权所有人允许和同意第三方无条件的使用与传播。

推荐引用：

引用格式(中文)：
赵立仕等,2011,苏云金芽孢杆菌S3299-1的cry1Ac31基因鉴定与表达,基因组学与应用生物学(online),Vol.30 No.5 pp.1026-1031 (doi: 10.5376/gab.cn.2011.30.0005)
引用格式(英文)：
Zhao et al.,2011, Identification and expression of cry1Ac31 from Bacillus thuringiensis S3299-1, Jiyinzuxue Yu Yingyong Shengwuxue (Genomics and Applied Biology), Vol.30 No.5 pp.1026-1031 (doi: 10.5376/gab.cn.2011.30.0005)

 

本研究对从海南岛吊罗山热带雨林的土壤样品中分离的一株Bt菌株S3299-1进行了特性鉴定和基因克隆。镜鉴观察表明，Bt菌株S3299-1在芽孢形成期能产生典型的对鳞翅目小菜蛾有毒性的菱形晶体伴孢蛋白。通过PCR-RFLP方法鉴定该菌株cry1A基因型与模式菌株HD73相似。用PCR方法从S3299-1克隆了完整的ORF全长为3 537 bp，编码1 178个氨基酸(GeneBank Accession No. GU446674)，由Bt毒素命名系统命名为cry1Ac31。我们将全长基因连接到表达载体pQE30Xa构建了表达重组质粒pQE1Ac31，用化学转化方法将其转入到表达宿主大肠杆菌JM110及M15中，分别获得表达重组子pQE1Ac31JM和 pQE1Ac31M。SDS-PAGE电泳分析表明，cry1Ac31基因在大肠杆菌中异源表达约130 kD的蛋白。SDS-PAGE分析表明，表达的Cry1Ac31蛋白大小约为130 kD。生物测定结果表明， 异源表达的Cry1Ac31蛋白对小菜蛾的有很高的杀虫活性(LC₅₀为2.204 ng/mL)，但比野生型菌株的伴孢蛋白对小菜蛾的杀虫活性(LC₅₀为1.504 ng/mL)及HD73的伴孢蛋白对小菜蛾的杀虫活(LC₅₀为2.058 ng/mL)要低。

苏云金芽孢杆菌；cry1Ac31；PCR-RFLP；SDS-PAGE；大肠杆菌表达；生物测定