周小芬¹ , 王华倩¹ , 王真史¹ , 林卫萍¹ , 杜志云¹ , 张焜^1,2

1广东工业大学轻工化工学院, 广州, 510006; 2五邑大学, 江门, 529020
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2015 年, 第 34卷, 第 97 篇   
收稿日期: 2015年01月07日    接受日期: 2015年01月30日

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醛还原酶(Aldehyde reductase AKR1A1, EC1.1.1.2 )是醛酮还原酶家族成员，能将有毒醛还原成相应的醇。构建含有组氨酸标签、肠激酶切位点与AKR1A1基因的原核重组表达载体pET-22b-(His)6-DDDDK-AKR1A1。将该质粒转化至Rosetta宿主菌中，通过对表达条件的优化，确定表达条件为0.25 mMIPTG、16℃、80rpm诱导14h，重组蛋白以可溶形式表达。采用亲和纯化得到纯度为90%的pelB-(His)6-DDDDK-AKR1A1融合蛋白。重组蛋白用肠激酶特异性剪切，经过Ni-NTA、Sephadex G-75再次纯化，得到纯度为98%的野生型AKR1A1蛋白。使用Western blotting和蛋白质序列分析对蛋白质进行鉴定。利用体外酶动学方法测定(His)6-DDDDK-AKR1A1的比活力为(41.3±0.1)U/mg、AKR1A1比活力为 (79.4±0.15)U/mg。使用该蛋白建立醛还原酶抑制剂筛选方法，对已上市的13种非甾体抗炎药(Non-Steroidal Anti-Inflammatory Drugs  NSAIDs)的抑制活性进行测定。结果表明奥沙普秦、酮基布洛芬、托芬那酸、氟灭酸等对AKR1A1有很高抑制作用。本研究表达纯化了高比活力的野生型醛还原酶，并应用该酶研究已上市的非甾体抗炎药对AKR1A1的抑制活性，所获得结果为非甾体抗炎药的副作用提供了参考。 

醛还原酶；原核表达；非甾体抗炎药