刘金凤¹ , 吴健敏¹ , 杜毅超^1,2 , 覃绍敏¹ , 林俊¹ , 马玲¹ , 白安斌¹ , 陈凤莲¹ , 饶桂波¹

1广西兽医研究所, 广西畜禽疫苗新技术重点实验室, 南宁, 530001; 2广西大学动物科学技术学院, 南宁, 530001
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基因组学与应用生物学, 2015 年, 第 34卷, 第 154 篇   
收稿日期: 2015年03月02日    接受日期: 2015年03月31日

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为构建抗PRRSV与抗人红细胞单链抗体(2E8-ScFv)融合的双功能单链抗体基因并预测其结构和功能。以PRRSV杂交瘤细胞株为模板，通过RT-PCR和SOE-PCR构建PRRSV-ScFv基因，将其重组到2E8-ScFv C端构建双功能单链抗体基因并测序分析，利用生物信息学软件预测其结构功能。结果显示，成功获得长735bp的PRRSV-ScFv基因，由Linker、VH和VL组成，VH、VL均含明确的CDR和FR区及特征性Cys，与多种鼠源ScFv基因高度同源，具有重组功能性鼠源抗体可变区特征，与2E8融合后形成全长1470bp的2E8-PRRSV-ScFv基因。经生物信息学分析，融合基因编码490个氨基酸，为亲水性蛋白；结构预测分析显示，其存在丰富的二级结构，可折叠形成含有多个沟槽结构的空间构象，利于抗原的结合，理论上具有良好的抗原结合活性。本研究成功构建抗PRRSV双功能单链抗体基因并对其编码的蛋白质结构进行了预测，为今后进行融合蛋白的表达及最终研究PRRSV抗原快速检测方法奠定基础。

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)；双功能单链抗体；序列分析；蛋白结构预测