鄢胜飞 , 黄建芳 , 郭晓萍 , 蒋钦杨 , 郭亚芬 , 兰干球

广西大学动物科学技术学院, 南宁, 530004
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2015 年, 第 34卷, 第 362 篇   
收稿日期: 1970年01月01日    接受日期: 1970年01月01日

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本研究通过克隆广西巴马小型猪GK基因以及构建重组真核表达载体pEGFP-N1-GK，并在PK15细胞内成功表达，为生产转GK基因的广西巴马小型猪奠定一定基础。本实验以广西巴马小型猪肝脏组织为材料,通过RT-PCR的方法扩增并克隆猪GK基因的编码序列, 并进行生物信息学分析，并将GK基因亚克隆至pEGFP-N1载体上，构建含有GK基因的真核表达载体pEGFP-N1-GK，经过PCR和双酶切的验证，通过脂质体转染，将重组质粒pEGFP-N1-GK转染猪的PK15细胞，48小时之后通过荧光显微镜观察细胞荧光蛋白的表达。研究结果表明广西巴马小型猪GK基因编码区序列长1575bp长的片段，共编码524个氨基酸，与Pubmed中查询到的猪(FJ436399.1) 的GK基因同源最高，序列比对发现，在461bp和 534 bp处都发生了C-T的碱基突变，只有461bp位点的突变引起相应编码氨基酸的变化，成功构建pEGFP-N1-GK真核表达载体，并在PK15细胞中成功转录表达。为进一步研究葡萄糖激酶基因（GK）与糖尿病之间的关系，以及生产转GK基因的广西巴马小型猪奠定基础。

广西巴马小型猪；GK基因；糖尿病；真核表达载体