河川沙塘鳢TLR2基因的克隆及表达分析  

于兴达1 , 王佩佩1 , 汪亚媛1 , 贾秀琪1 , 张国松1 , 尹绍武1 , 陈树桥2 , 周国勤2
1南京师范大学, 生命科学学院, 江苏省生物多样性与生物技术重点实验室, 南京, 210023; 2南京市水产科学研究所, 南京, 210036
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2016 年, 第 35卷, 第 45 篇   
收稿日期: 1970年01月01日    接受日期: 1970年01月01日
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摘 要

先天免疫是机体防御病原微生物入侵的第一道防线,TLR能识别病原相关分子模式,通过依赖MyD88或TRIF信号传导通路启动先天免疫和适应性免疫而抵御病原入侵。本研究以河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)为研究对象,采用RACE、实时荧光定量PCR等技术,首次对该鱼的TLR2基因进行了克隆和表达模式分析。主要研究结果如下:TLR2基因的cDNA全长序列3473bp(Genbank登录号KP973949),包括2631bp开放阅读框(ORF)、75bp的5´UTR区和767bp的3´UTR区,并且具有脊椎动物典型的加尾信号AATAAA和26bp的polyA尾巴,推测该序列编码876个氨基酸。TLR2基因存在LRR基序和TIR结构域,符合TLR家族所具备的重要特征;TLR2蛋白分子也存在多个功能位点。系统树中河川沙塘鳢与所有鱼类聚类为独立的分支,与鲈形目亲缘关系最近。应用RT-PCR法检测健康河川沙塘鳢鱼体中TLR2基因的mRNA组织分布情况。结果显示,TLR2基因在检测的12种组织中均有表达,在肝、肾、肠、血液和胃中都有较高的表达水平。人工感染嗜水气单胞菌后,对河川沙塘鳢3种主要免疫组织(脾、肾、肝)中进行不同时段表达量变化的检测,结果表明,TLR2基因在脾中感染后4h表达水平发生下降,随后的24-48h又上升,48h时达到顶峰,72-96h维持在略低于24h水平上。在肾中,感染后表达水平持续上升,且24-96h间保持相对稳定的表达水平。在肝组织中,感染后一直呈现上升趋势,72h时达到顶峰,其他时段表达水平相差不大。可见TLR2在河川沙塘鳢抵御外源微生物侵染的先天免疫中发挥重要作用。

关键词
河川沙塘鳢;TLR2;RT-PCR;表达分析
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基因组学与应用生物学
• 第 35 卷
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