刘卓明^1,2* , 柳参奎^3* , 李有志¹ , 方宣钧^1,2,3

1. 广西大学生命科学与技术学院, 南宁, 530005
2. 海南海德热带农业资源研究所, 三亚, 572025
3. 东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心, 哈尔滨, 150040
* 同等贡献作者
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2011 年, 第 30卷, 第 19 篇   doi: 10.5376/gab.cn.2011.30.0019
收稿日期: 2010年12月22日    接受日期: 2011年04月21日    发表日期: 2011年04月27日

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推荐引用：

引用格式(中文)：
刘卓明等, 2011,苏云金芽孢杆菌Cry1Ac22杀虫晶体蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化,基因组学与应用生物学(online), Vol.30 No.19 pp.1120-1125 (doi: 10.5376/gab.cn.2011.30.0019)
引用格式(英文)：
Liu et al., 2011, Heterologous expression and purification of Cry1Ac22 toxin from Bacillus thuringiensis W015-1, Bioscience Methods(Online), Vol.1 No.2(DOI:10.5376/bm.2010.01.0002) 

用PCR技术从苏云金芽孢杆菌W015-1菌株中克隆了cry1Ac22基因，将该基因连接到pQE30原核表达载体上，构建了重组表达质粒pQE30-Cry1Ac22，并转化E. coli M15宿主菌。用IPTG诱导表达出了His-tag-Cry1Ac22融合蛋白。不同的IPTG浓度和培养温度的比较实验，获得了最佳诱导表达条件为：1 mmol/L IPTG浓度和28℃的培养温度。SDS-PAGE结果表明，转化了pQE30-Cry1Ac22的宿主菌株表达出了分子量为133 kD的His-tag-Cry1Ac22融合蛋白，表达的融合蛋白在细胞中以包涵体的形式存在。经Ni²⁺-NTA树脂亲和层析得到了纯化的His-tag-Cry1Ac22融合蛋白，并在体外检测纯化的目的蛋白浓度纯度达80%左右，浓度为1 177 μg/mL。生物活性测定表明工程菌株粗提液和纯化蛋白对小菜蛾二龄幼虫具有较高毒力。本研究为采用外源性Cry1Ac22蛋白制备抗体和进行定量杀虫活性的测定提供了方法。

苏云金芽孢杆菌W015-1；Cry1Ac22；融合蛋白；原核表达；纯化；生物测定