刘嘉琪 , 程晓芳 , 周亭亭 , 严雪瑜 , 韦玲静 , 司景磊 , 蒋钦杨 , 黄艳娜

广西大学动物科学技术学院, 南宁, 530004
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2016 年, 第 35卷, 第 252 篇   
收稿日期: 2016年03月08日    接受日期: 2016年04月20日

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葡萄糖转运蛋白4（Glut4）是调控肌肉葡萄糖代谢的关键因子。本研究旨在克隆广西巴马小型猪Glut4基因，构建真核表达载体，转染C2C12细胞研究Glut4功能。以广西巴马小型猪背最长肌组织作为实验材料，通过RT-PCR 技术扩增出Glut4基因编码序列，连接入PMD18－T克隆载体，测序鉴定正确后提取克隆质粒。用BamHⅠ和HindⅢ限制性内切酶双酶切克隆质粒，获得Glut4片段，连接至pEGFP-N1 载体上，构建pEGFP-N1-Glut4表达载体，提取pEGFP－N1－Glut4重组质粒转染至C2C12细胞，观察细胞荧光表达情况，并检测转染24h和48h时培养液的葡萄糖水平。实验结果表明：广西巴马小型猪Glut4基因编码区序列长1530 bp，编码509个氨基酸，与参考序列（序列号为EU590115.1）的同源性为99.7%；重组质粒转染C2C12细胞能表现出绿色荧光。转染24h和48h时，pEGFP-N1-Glut4组细胞培养液的葡萄糖浓度均显著低于空载体组（16.08±0.49 vs. 17.13±0.13，4.93±0.19 vs. 6.28±0.12，P<0.01）。在C2C12成肌细胞中过表达广西巴马小型猪Glut4基因，能增加细胞的葡萄糖摄入量。

广西巴马小型猪；Glut4基因；基因克隆；真核表达