钱洁颖¹ , 马成通¹ , 晁耐霞^1,2 , 陈奇聪¹ , 蓝秀万^1,2 , 孙健^1,2 , 吴耀生^1,2

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基因组学与应用生物学, 2016 年, 第 35卷, 第 277 篇   
收稿日期: 2016年03月03日    接受日期: 2016年04月06日

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为研究葫芦科植物中三萜皂苷生物合成通路中的关键酶鲨烯合酶的分子进化，克隆青皮苦瓜鲨烯合酶基因的cDNA序列，并进行正选择分析。根据葫芦科植物之间的同源性设计青皮苦瓜鲨烯合酶引物。采用3^，RACE和5^，RACE快速扩增技术分两步进行巢式PCR扩增鲨烯合酶ORF序列。根据克隆出来的青皮苦瓜编码框序列以及在GenBank数据库中完整的陆生植物鲨烯合酶编码框序列信息，用贝叶斯方法和PAML4软件进行鲨烯合酶的正选择分析。青皮苦瓜鲨烯合酶基因cDNA的克隆，命名为McSS，其cDNA序列全长分别为1 548 bp，ORF 1 251 bp，编码417个氨基酸残基。通过正选择运算，检测到33个正选择位点，其正选择位点主要集中在第二跨膜区及其两侧。本研究成功克隆得到青皮苦瓜鲨烯合酶基因全长cDNA序列并对其正选择分析，在三萜合成通路上为鲨烯合酶的定点突变提供重要参考。

青皮苦瓜；基因克隆；鲨烯合酶；正选择