叶柳 , 李曌 , 陈振银 , 刘笃强 , 廖键梅 , 陈雄斌 , 熊伟 , 刘兆雨 , 熊丽荣 , 李晶 , 黄琴 , 李伟 , 彭彦 , 唐勇 , 刘永刚

重庆医科大学基础医学院, 组织细胞工程与干细胞研究室, 分子医学与肿瘤研究中心, 药物化学实验室, 重庆, 400016
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2016 年, 第 35卷, 第 487 篇   
收稿日期: 2016年07月15日    接受日期: 2016年08月31日

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钙结合蛋白S100A9在许多慢性疾病中聚集并可能在一些自身免疫性如老年痴呆中发挥了重要的作用。大量的报道也表明S100A9日益获得人们的注意。通过获取足量重组人S100A9蛋白，探索其对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的作用及机制。运用全基因合成法合成人S100A9基因，构建人S100A9原核表达重组质粒pET28a-S100A9，经单酶切法及PCR法鉴定重组质粒已构建成功。利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)在18℃、25℃、37℃分别诱导表达，经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting鉴定，结果显示18℃时蛋白大量表达于上清中，在37℃时大量表达于包涵体。采用镍亲和层析法分别纯化两种来源重组蛋白，透析后低温冻干获得蛋白粉。使用CCK-8法检测上清来源和包涵体来源的S100A9蛋白对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的增殖抑制作用。结果显示两种来源重组蛋白对SH-SY5Y细胞具有生长抑制作用，在浓度为0.05 mg/mL时即有明显抑制作用(p<0.01)，且二者作用无明显差异(p<0.01)。采用AO/EB双重染色和流式细胞术初步检测S100A9对SH-SY5Y细胞的增殖抑制机理，结果显示该蛋白可促进SH-SY5Y细胞的凋亡。两种来源蛋白之间的比较也显示二者对于SH-SY5Y细胞作用无明显差异(p<0.05)。本研究成功获得足量S100A9重组蛋白，且两种来源S100A9蛋白作用于SH-SY5Y细胞的生物学效应一致。

S100A9；重组质粒；蛋白表达；SH-SY5Y；凋亡