李文品^1,2 , 廖玉才^2,3 , 黄涛^1,2 , 李和平^1,2

1华中农业大学生命科学技术学院, 武汉, 430070;
2华中农业大学麦类作物分子生物技术实验室, 武汉, 430070;
3华中农业大学植物科学技术学院, 武汉, 430070
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2012 年, 第 31卷, 第 72 篇   
收稿日期: 2012年05月17日    接受日期: 2012年08月15日

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根据拟南芥叶绿体基因组序列设计PCR引物，从我国甘蓝型油菜栽培品种F4叶绿体基因组中克隆了长度为1.5 kb的trnI和trnA 2个基因序列，核酸序列分析表明它们与拟南芥基因的同源性高达94%和99%，这两个克隆的油菜叶绿体基因组序列trnI和trnA被用于构建叶绿体定点整合表达载体。利用烟草叶绿体基因强启动子Prrn和终止子TpsbA，以及筛选标记基因aadA和目的基因HSA，构建了多顺反子表达盒Prrn-aadA-HSA-TpsbA，将表达盒置于油菜叶绿体trnI和trnA序列之间，最后构建成油菜叶绿体多顺反子定点整合表达载体pIPaHTA。酶切鉴定及序列分析证实，构建的表达载体具有预期的调控元件及结构，这为后期油菜叶绿体转化体系的建立奠定了基础。

油菜(Brassica napus)；叶绿体；同源重组；多顺反子表达载体