宋伟栓¹ , 庞彩红² , 李双云² , 李丽² , 杨克强¹ , 夏阳²

1. 山东农业大学林学院, 泰安, 271018
2. 山东省林业科学研究院林木遗传育种重点实验室, 济南, 250014
作者    通讯作者
《分子植物育种》网络版, 2013 年, 第 11卷, 第 4 篇   doi: 10.5376/mpb.cn.2013.11.0004
收稿日期: 2013年01月11日    接受日期: 2013年03月13日    发表日期: 2013年04月23日

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推荐引用：

引用格式(中文)：
宋伟栓等, 2013, 国槐SRAP-PCR反应体系的建立与优化, 分子植物育种(online), 11(4): 1019-1024 (doi: 10.5376/mpb.cn.2013.11.0004)
引用格式(英文)：
Song et al., 2013, Establishment and Optimization of SRAP-PCR Reaction System in Sophora japonica L., Fenzi Zhiwu Yuzhong (online) (Molecular Plant Breeding), 11(4): 1019-1024 (doi: 10.5376/mpb.cn.2013.11.0004)
 

本实验以国槐叶片DNA为模板，利用SRAP(相关序列多态性)分子标记技术，采用L₁₆(4⁵)正交设计和单因子设计相结合的方法，对国槐SRAP-PCR反应体系中主要因素(DNA、Mg²⁺、dNTPs、primer、ExTaqDNA聚合酶)进行优化筛选，得出如下结论：各因素不同水平对PCR反应结果都有显著影响，其中ExTaq 酶量影响最大；筛选出各反应因素的最佳水平，确立SRAP-PCR反应的最佳体系（20 μL）为：Mg²⁺浓度 2.0 mmol/L，模板DNA 80 ng，dNTPs 2.5 mmol/L，引物0.6 μmol/L，ExTaqDNA聚合酶0.75 U，10×PCR buffer2.5 mmol/L；应用该优化体系对退火温度进行了筛选，得出50℃为最佳退火温度。利用该优化体系，从100对SRAP 引物组合中筛选出6对扩增条带清晰，多态性高的引物组合，多态性条带比率高达88.55%。该优化体系的建立为下一步进行古国槐遗传多样性分析，新品种的选育和种质资源的保存利用等奠定了基础。

国槐；SRAP；正交设计；单因子优化