李玉洁¹ , 南奇延² , 金美玉¹ , 曹后男¹ , 山本義治³ , 赵成日¹

1延边大学农学院, 延吉, 133002
2延边大学附属医院, 延吉, 133000
3岐阜大学, 岐阜, 5011193
作者    通讯作者
《分子植物育种》网络版, 2020 年, 第 18卷, 第 27 篇   
收稿日期: 2020年08月03日    接受日期: 2020年08月06日    发表日期: 2020年08月13日

本文首次发表在 分子植物育种（(ISSN1672-416X，CN46-1068/S)）上。现依据版权所有人授权的许可协议，采用 Creative Commons Attribution License,协议对其进行授权，再次发表与传播。只要对原作有恰当的引用, 版权所有人允许并同意第三方无条件的使用与传播。

推荐引用：

李玉洁, 南奇延, 金美玉, 曹后男, 山本義治, 赵成日, 2020, 荧光素酶表达载体yy621的构建及鉴定, 分子植物育种(网络版), 18(27): 1-9 (doi: 10.5376/mpb.cn.2020.18.0027) (Li Y.J., Nan Q.Y., Jin M.Y., Cao H.N., Yamamoto Y Yoshiharu and Zhao C.R., 2020, Construction and identification of luciferase expression vector yy621, Fengzi Zhiwu Yuzhong (Molecular Plant Breeding (online)), 18(27): 1-9 (doi: 10.5376/mpb.cn.2020.18.0027))

在载体yy449的CaMV 35S minimal启动子序列与LUC基因序列之间增加Bgl II限制性内切酶位点，构建yy621载体。用PCR的方法分别扩增CaMV 35S minimal启动子序列与LUC基因。引物设计要满足如下条件：CaMV 35S minimal启动子序列扩增片段的上游应包括BamH I、下游应包括Bgl II限制性内切酶位点；LUC基因序列扩增片段的上游应包括Bgl II、下游应包括Xba I限制性内切酶位点。以上两个片段先用Bgl II限制性内切酶消化后进行连接，得到CaMV 35S minimal启动子序列与LUC基因序列之间含Bgl II限制性内切酶的识别位点的片段，然后再用BamH I和Xba I限制性内切酶进行消化，插入到载体yy449的BamH I和Xba I酶切位点之间，替换原有的CaMV 35S minimal启动子序列与LUC基因序列。经菌落筛选、PCR鉴定和测序验证，阳性菌落中的CaMV 35S minimal启动子序列与LUC基因序列之间包含Bgl II限制性内切酶的识别位点，载体yy621构建成功。本实验中构建的萤光素酶表达载体yy621，适于今后用抗性相关基因替换LUC基因，测定合成启动子对抗性相关基因的具体调控与赋予植物对不良环境的具体抗性表现，或者用全长启动子序列替换CaMV 35S minimal启动子序列(-46~+1)来观察LUC基因的表达调控具有重要的意义。

荧光素酶；yy621载体；构建