研究报告

黑果枸杞 ISSR-PCR 反应体系的正交设计优化  

钱前1,2 , 王钧1,2 , 王莉1 , 李毅1 , 胡延萍1*
1 中国科学院西北高原生物研究所, 青海省青藏高原特色生物资源研究重点实验室, 西宁, 810008; 2 中国科学院大学, 北京, 100049
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16 卷, 第 26 篇   
收稿日期: 2018年02月05日    接受日期: 2018年03月02日    发表日期: 2019年01月17日
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摘要

黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)为茄科枸杞属小灌木。果实为黑紫色球形浆果,具有较高的药用价值、营养价值、生态价值和经济价值。该研究以青海省野生黑果枸杞为材料,将对黑果枸杞 ISSR-PCR 反应产生主要影响的五种因子(Taq DNA 聚合酶, dNTP, Mg2+引物和模板 DNA)进行 L16(45)的正交试验,以建立黑果枸杞 ISSR-PCR 最佳反应体系,并对反应体系进行验证。在此基础上筛选出适宜的 ISSR 引物,用梯度法优化各引物的最佳退火温度。结果表明:黑果枸杞 20 μL ISSR-PCR 反应体系中包括 Taq DNA 聚合酶 0.02 U/20 μLMg2+ 1.65 mmol/LdNTP 0.15 mmol/L,引物 0.60 μmol/L 和模板 DNA 50 ng;在 100 ISSR 引物中筛选出 16 条最适引物,并确定了各引物的最适退火温度为 44~54.5;最佳扩增程序设定为 94预变性 5 min;然后 94变性 20 s44~54.5复性 1 min72延伸 1 min 20 s,共进行 38 个循环;最后 72延伸 6 min4保存。该体系在黑果枸杞不同样品中所得条带清晰且多态性丰富,有助于后续青海省黑果枸杞种质资源筛选和遗传多样性分析研究。

关键词
黑果枸杞;枸杞属;ISSR-PCR;正交试验设计;反应体系

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《分子植物育种》印刷版
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