研究论文/Research Article

‘库尔勒香梨’自交不亲和S-RNase等位基因全长的克隆与分析  

吕文娟 , 冯建荣* , 刘小芳 , 刘海楠 , 李文慧 , 钟颖
新疆石河子大学, 农学院, 石河子, 832003
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2016 年, 第 14 卷, 第 1 篇   
收稿日期: 2016年10月11日    接受日期: 2016年11月17日    发表日期: 2016年11月10日
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摘要

‘库尔勒香梨’是新疆重点发展的特色果树品种之一,具有自交不亲和性。本研究以新疆轮台国家果树资源圃栽培梨品种‘库尔勒香梨’为试材,利用梨S基因的保守序列设计合成的引物:‘FTQQYQ’/ ‘anti-IIWPNV’ 初步确定‘库尔勒香梨’S-RNase等位基因型后,设计等位基因特异性引物,利用RT-PCR克隆两个花柱S-RNase等位基因cDNA片段,RACE(cDNA末端快速扩增)技术进行cDNA全长克隆,采用BLAST进行序列比对,Protparam等在线软件分析两个S-RNase等位基因的编码蛋白特性。根据NCBI上已登录的63条梨属S-RNase基因的全长序列,用DNAMAN软件对其氨基酸序列进行比对并用MEGA 4.0构建进化树。本试验从‘库尔勒香梨’中克隆得到了S22-RNase(GenBank接受号:KX214125)/ S28-RNase(GenBank接受号:KX214124)等位基因cDNA的全长序列,为分子手段调控梨自交不亲和性状奠定了基础。S22-RNase基因 cDNA全长904 bp,ORF(开放阅读框)长684 bp,编码227个氨基酸;S28-RNase基因cDNA全长921 bp,ORF长687 bp,编码228个氨基酸。BLASTP比对显示,这两个基因都具有保守的RNase-T2基因结构,属于RNase-T2家族。预测相对分子质量分别为25.6 kDa和25.9 kDa,等电点9.36和9.30,都属于亲水性蛋白。进化分析表明,‘库尔勒香梨’的S22-RNaseS28-RNase处在不同的两个分支上,表明两基因亲缘关系较远。

关键词
梨;自交不亲和;S-RNase基因;RACE

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《分子植物育种》印刷版
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