研究报告/Research Report

苦瓜ISSR-PCR反应体系的建立与优化  

林珲1,2,3 , 汪伟裁1,2,3 , 李大忠1,2,3 , 薛珠政1,2,3 , 李永平1,2,3 , 张前荣1,2,3 , 康玉妹1,2,3 , 温庆放1,2,3
1福建省农业科学院蔬菜研究中心, 福州, 350013;
2福建省农业科学院作物研究所, 福州, 350013;
3福建省蔬菜工程技术研究中心, 福州, 350013
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 21 篇   
收稿日期: 2017年06月09日    接受日期: 2017年06月29日    发表日期: 2018年05月22日
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摘 要

为建立适合于苦瓜的ISSR反应体系,为后续苦瓜瓜的遗传多样性分析和亲缘关系鉴定奠定基础,本研究以“609”苦瓜品种作为模板DNA,试验采用单因素试验设计对影响反应体系的DNA模板、引物、dNTP和Taq酶的含量进行优化,并对单因素结果进行L9(33)正交试验设计。研究结果表明,苦瓜ISSR:20 µL最佳反应体系为:2 µL的10×Buffer (含Mg2+),30 ng模板DNA,0.25 mmol/L的dNTP,0.5 µmol/L的引物,1.25 U的TaqDNA聚合酶。在此基础上,对优化引物的退火温度,确定最适宜的退火温度。验证优化的最佳反应体系,选用引物cw39132对48个苦瓜品种进行所确立扩增体系的验证,结果显示扩增产物条带清晰明亮、多态性丰富,且特异性强和重复性好,表明本研究所确定的反应体系适用于苦瓜的ISSR分子标记。

关键词
苦瓜;ISSR;分子标记;PCR扩增
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• 第 16 卷
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