研究报告/Research Report

苦瓜ISSR-PCR反应体系的建立与优化  

林珲 , 汪伟裁 , 李大忠 , 薛珠政 , 李永平 , 张前荣 , 康玉妹 , 温庆放
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2017 年, 第 15卷, 第 21 篇   
收稿日期: 2017年06月01日    接受日期: 2017年07月11日    发表日期: 2017年08月02日
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摘 要

为建立适合于苦瓜的ISSR反应体系,为后续苦瓜瓜的遗传多样性分析和亲缘关系鉴定奠定基础,本研究以‘609’苦瓜品种作为模板DNA,试验采用单因素试验设计对影响反应体系的DNA模板、引物、dNTP和Taq酶的含量进行优化,并对单因素结果进行L9(33)正交试验设计。研究结果表明,苦瓜ISSR:20 µL 最佳反应体系为: 2 µL的10×Buffer(含Mg2+),30 ng模板DNA,0.25 mmol/L的dNTP,0.5 µmol/L的引物,1.25 U的TaqDNA聚合酶。在此基础上,对优化引物的退火温度,确定最适宜的退火温度。验证优化的最佳反应体系,选用引物cw39132 对48 个苦瓜品种进行所确立扩增体系的验证,结果显示扩增产物条带清晰明亮、多态性丰富,且特异性强、重复性好,表明本研究所确定的反应体系适用于苦瓜的ISSR 分子标记。

关键词
苦瓜;ISSR;分子标记;PCR扩增
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• 第 15 卷
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