研究报告/Research Report

番茄叶片DNA快速微量提取、SSR-PCR反应体系优化及引物筛选  

芮文婧1 , 张倩男1 , 王晓敏11 , 张学琴1 , 胡学义1 , 高艳明12 , 李建设123
1宁夏大学农学院, 银川, 750021;
2宁夏设施园艺(宁夏大学)技术创新中心, 银川, 750021;
3宁夏现代设施园艺工程技术研究中心, 银川, 750021
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 0 篇   
收稿日期: 2017年07月28日    接受日期: 2017年08月31日    发表日期: 2018年04月16日
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摘 要

摘要:为了进一步开发利用番茄种质资源和开展分子标记辅助选择育种,本研究利用高通量组织研磨机研磨微量叶片,通过改良CTAB法快速提取DNA,并利用L16(45)正交设计试验,综合采用直观量化分析和方差分析两种方法,分析Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA浓度5个因素对番茄SSR-PCR扩增的影响,比较不同处理组合扩增效果的差异,最终筛选与验证最优的番茄SSR-PCR反应体系,并在此体系下对SSR引物进行筛选。结果表明番茄SSR-PCR最佳反应体系(20µl)为引物0.5µmol/L、Mg2+ 3.0mmol/L、dNTPs 0.4mmol/L、Taq DNA聚合酶0.5U、模板DNA 40ng;且利用该反应体系,从540对SSR引物中成功筛选出了扩增条带清晰、多态性丰富的引物373对(占69.07%)。该SSR-PCR体系的建立为番茄种质资源遗传多样性分析,品种鉴定及指纹图谱构建等研究提供了一个标准化的程序。

关键词
番茄;正交设计;SSR-PCR;体系优化;引物筛选
《分子植物育种》官方网站
• 第 16 卷
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