张俊祥 , 吴建圆 , 冀志蕊 , 迟福梅 , 蒋晓玲 , 董庆龙 , 周宗山

中国农业科学院果树研究所, 兴城, 125100
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2014 年, 第 33 卷, 第 172 篇   
收稿日期: 2014年10月02日    接受日期: 2014年10月29日

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围小丛壳菌，一种子囊菌真菌，能引起苹果炭疽叶枯病。本研究的目的是建立和优化农杆菌介导的苹果炭疽叶枯病菌遗传转化技术体系，获得产孢与致病性变异的突变体，为开展该菌的分生孢子形成机制、致病机理研究奠定基础。对影响转化效率的主要因子进行单因子条件测验，对转化子进行PCR鉴定、绿色荧光观察和产孢及致病性分析。优化的遗传转化体系：预诱导4 h，培养介质滤纸，分生孢子浓度1 × 10⁶个/ml，农杆菌浓度OD₆₀₀ = 0.3，乙酰丁香酮浓度50 μmol/ml，21°C，共培养时间24 h。利用这一体系，每10⁶个分生孢子能产生350～400个转化子。通过转化子潮霉素抗性基因的PCR检测和荧光观察，证实潮霉素抗性基因和gfp基因已成功整合到该病菌基因组中。产孢和致病性检测结果显示，转化子M421、M755和M903致病力明显下降，转化子M285和M744丧失了致病能力，转化子M598和M856丧失了产孢能力和致病能力。本研究建立和优化了农杆菌介导的苹果炭疽叶枯病菌遗传转化技术体系，构建了该病菌的绿色荧光蛋白标记的突变体库，获得了产孢与致病性变异的转化子。

炭疽菌；GFP；分生孢子；毒力；农杆菌介导的遗传