赵桂红 , 张妮妮 , 高帅帅 , 陆苗 , 王晶 , 张天翼 , 李焘^*

陕西师范大学, 西北濒危药材资源开发国家工程实验室, 药用资源与天然药物化学教育部重点实验室, 西安, 710119
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基因组学与应用生物学, 2018 年, 第 37 卷, 第 43 篇   
收稿日期: 2017年01月19日    接受日期: 2017年01月25日    发表日期: 2018年01月25日

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本研究对菘蓝CYP83A1基因进行了克隆、表达特性及原核表达研究。结果表明，IiCYP83A1基因组DNA全长为1 622 bp，包含2个外显子和1个内含子；cDNA全长为1 512 bp，编码503个氨基酸。IiCYP83A1编码的蛋白包含2个跨膜结构域，无信号肽，主要定位于内质网膜，属于亲水性蛋白，二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲组成，与萝卜、欧洲油菜、西兰花和芜菁等植物的CYP83A1蛋白具有较高的同源性。qRT-PCR结果表明，IiCYP83A1在不同组织中的表达具有显著性差异，表现为茎>叶>果>花和根；在幼苗期、生长期和花期的表达量显著高于萌芽期；茉莉酸甲酯(MeJA)和伤害处理能够显著促进该基因的表达，而低温(4℃)和水杨酸(SA)处理则对其表达具有一定的抑制作用。将克隆到的IiCYP83A1基因连接到表达载体pET-28a上，构建原核表达载体pET-28a-IiCYP83A1并对其进行原核表达。SDS-PAGE结果显示，在E. coli BL21中成功诱导表达了CYP83A1蛋白，与预期蛋白分子量大小一致。本研究结果可为进一步研究IiCYP83A1的功能提供实验依据。

菘蓝；CYP83A1；基因克隆；表达特性；原核表达