韩娇娇 , 余君萍 , 宋明 , 梁婉琪^*

上海交通大学生命科学技术学院, 上海, 200240
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2018 年, 第 37 卷, 第 60 篇   
收稿日期: 2017年03月07日    接受日期: 2017年03月13日    发表日期: 2018年02月25日

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植物类受体激酶在植物生长发育及响应外界环境信号刺激中具有重要作用，为了进一步研究水稻 类受体激酶 OsBAK1L 的功能，我们利用 CRISPR/Cas9 技术对该基因进行定点编辑。OsBAK1L 定位在细胞 膜上且该基因预测编码蛋白包含三个功能结构域：胞外 LRR 结构域、跨膜结构域及胞内激酶域。为了进一步 理解该蛋白不同结构域上的功能，我们分别在胞外 LRR 结构域(Target 1)和胞内激酶域(Target 2)上设计该基 因定点编辑靶点。将合成的靶位点序列插入入门载体 CH，然后与表达载体 Cas9 进行重组。重组载体通过农 杆菌介导方法转入野生型水稻 9522 中，2 个构建分别获得 26 棵和 12 棵潮霉素抗性植株。通过对转基因植 株的测序分析，找到了 3 棵和 2 棵序列发生变化的杂合 T0 代植株。T0 代杂合植株自交分离分别获得 T1 代两 靶位点处纯合子突变体，靶位点 1 处纯合子突变体株系缺失 5 个碱基，靶位点 2 处纯合子突变体株系插入 1 个碱基，均可造成该基因转录本翻译提前终止。该基因不同结构域上突变体的获得为进一步研究该基因功 能提供了重要且稳定的遗传材料。

水稻；OsBAK1L；LRR-RLK；CRISPR/Cas9