于松 , 高庆荣 , 袁凯 , 张保雷 , 李楠楠

山东农业大学, 作物生物学国家重点实验室, 泰安, 271018
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2012 年, 第 31卷, 第 14 篇   
收稿日期: 2012年01月06日    接受日期: 2012年02月26日

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本研究以温光敏小麦为试材，用TCA/丙酮和酚提取法提取小麦幼穗蛋白样品，进行了双向电泳优化分析，并对双向电泳过程中出现的问题进行了讨论。结果表明，用TCA/丙酮法提取小麦幼穗蛋白质其产率（浓度）高于酚提取法。SDS-PAGE电泳显示，用TCA/丙酮提取法提取的蛋白质能获得较清晰条带，分辨率较高，而酚提取法提取的蛋白质其条带模糊，分辨率低。对蛋白质纯化除盐可以提高分辨率，减少横竖纹，获得背景清晰的圆形蛋白点。通过ImageMasterTM 2D Platinum5.0 软件分析凝胶图谱，结果显示纯化后可降低噪点，纯化后蛋白点数可从未纯化蛋白点数的216增加到583。显然，采用TCA/丙酮法可获得高浓度高质量的蛋白质，而进一步纯化、除盐离子可进一步获得背景清晰可高重复性的电泳图谱。在双向电泳实验过程中，观察到一些异常缺陷胶的出现，如双向电泳图谱中蛋白点扩散，蛋白聚集形成斑点串，没有点或点很少，出现纵纹横纹及图谱扭曲等影响图谱质量的严重问题，对这些问题作了分析与并提出了解决方案。

温光敏小麦；小麦蛋白质；TCA/丙酮提取法；酚提取法提取法；双向凝胶电泳；电泳条件优化