蔡凤^1,2 , 李铁军¹ , 解彦刚¹ , 李德全²

1南通职业大学化学与生物工程学院, 南通, 226007;
2南通大学生命科学学院, 南通, 226007
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2012 年, 第 31卷, 第 80 篇   
收稿日期: 2012年09月13日    接受日期: 2012年09月23日

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选用巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris系统表达特异性抗速灭威单链抗体(scFv)基因，以为速灭威特异性抗体的大量制备奠定基础。设计引物扩增阳性克隆scFv基因，亚克隆至表达载体pPICZα C，获得重组酵母表达质粒pPICZα C-scFv，线性化pPICZα C-scFv并高效电转P. pastoris (X-33)，对转化子进行抗性梯度筛选得到一株高效表达的X-33-Pp-SMW-12-6菌株。对获得的菌株先后进行表达条件的优化、优化条件下的诱导表达及单链抗体性质研究。结果表明：P. pichia-scFv的质量接近其亲本E. coli-scFv的质量，X-33-Pp-SMW12-6在优化条件下的表达产量达28 mg/L，比未优化前的产量提高了约8 mg/L，经纯化后抗体纯度可达85%以上。因此，利用Pichia pastoris表达系统制备抗速灭威单链抗体比细菌表达系统更有效、更经济。

巴斯德毕赤酵母；单链抗体；表达；速灭威；化学免疫特性