杨梅铜锌超氧化物歧化酶基因(MrCu/Zn-SOD1)的原核表达及活性鉴定 
董乐 
作者 通讯作者
基因组学与应用生物学, 2012 年, 第 31卷, 第 53 篇
收稿日期: 2012年04月20日 接受日期: 2012年06月13日
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摘 要
为获得高表达杨梅(Morella rubra)铜锌超氧化物歧化酶(MrCu/Zn-SOD1)的工程菌，本实验采用RT-PCR技术从杨梅果实中分离扩增了MrCu/Zn-SOD1的cDNA序列(456 bp)，将该基因重组到原核表达载体pGEX-2T中，酶切、测序分析表明，重组质粒pGEX-MrCu/Zn-SOD1结构正确。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。IPTG诱导表达分子量约41 kD融合蛋白GST-MrCu/Zn-SOD1。诱导表达后的菌体超声裂解液经谷胱甘肽亲和层析纯化，得到高纯度的GST-MrCu/Zn-SOD1。采用氯化硝基四氮唑蓝法和黄嘌呤氧化法分析其活性。结果表明，GST-MrCu/Zn-SOD1具有特异性SOD酶活性。
关键词
杨梅；铜锌超氧化物歧化酶；原核表达；活性检测
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