陈自洪^1,2 , 韦珏¹ , 孟凡丽¹ , 陆凤花¹ , 崔奎青¹ , 石德顺¹

1广西大学亚热带生物资源保护利用国家重点实验室, 南宁, 530004;
2广西壮族自治区人口和计划生育研究中心, 南宁 530021
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2012 年, 第 31卷, 第 54 篇   
收稿日期: 2012年03月27日    接受日期: 2012年04月25日

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本研究探讨了不同激活方法对水牛ICSI介导转基因效果的影响。水牛体外成熟卵进行ICSI介导转基因(ICSI-mediated gene transfer, ICSI-Tr)操作后，先用5 μmol/L的离子霉素(ionomycin, Ion)激活处理5 min，然后分成3组，再分别用10 μg/mL放线菌酮(cycloheximide, CHX)培养5 h (CHX5h组)、10 μg/mL CHX培养3 h后再用2 mmol/L的二甲氨基嘌呤(6-DMAP)培养2 h (CHX3h-DMAP2h组)或用培养液(CM)培养3 h后再用2 mmol/L 6-DMAP培养2 h (CM3h-DMAP2h组)。结果显示，CHX5h组的分裂率、早期胚胎基因表达率和囊胚发育率最高，且显著高于CM3h-DMAP2h组(66.7%比49.5%, P<0.05; 66.7%比40.0%, P<0.01; 22.2%比9.9%, P<0.05)。ICSI 18 h后检查原核形成率，发现CHX5h和CHX3h-DMAP2h处理组的完整精子头百分率显著低于CM3h-DMAP2h处理组(P<0.05)，2原核(pronucleus, PN)百分率则显著提高(42.4%比23.8%, P<0.05; 44.6%比23.8%, P<0.01)。以上结果表明，在水牛ICSI介导转基因时，Ion联合CHX较Ion联合6-DMAP激活重构胚效果好。 

杨梅；铜锌超氧化物歧化酶；原核表达；活性检测