谢志勤 , 谢芝勋 , 邓显文 , 谢丽基 , 庞耀珊 , 刘加波 , 范晴

广西壮族自治区兽医研究所, 广西畜禽疫苗新技术重点实验室, 南宁, 530001
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2012 年, 第 31卷, 第 55 篇   
收稿日期: 2012年04月06日    接受日期: 2012年05月24日

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根据GenBank中牛分枝杆菌的基因序列，设计合成一对扩增CFP-10基因完整ORF的特异性引物，以pET32a(+)为载体构建重组表达载体CFP-10/pET32a(+)。重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)，经0.9 mmol/L IPTG 37℃诱导3 h后表达，收集菌体并裂解，裂解后上清和沉淀经SDS-PAGE分析，结果表明融合蛋白分子量分别为30 KD，表达产物以可溶性存在于上清中，后经Ni-NTA吸附柱方法对目的蛋白进行纯化，经薄层凝胶扫描分析，纯化后的His融合蛋白纯度达95%，该CFP-10表达蛋白可作为体外诊断抗原，为进一步建立检测牛分枝杆菌的方法奠定基础。

牛分枝杆菌；CFP-10基因；表达；纯化