严兴荣¹ , 杨艳红² , 丁向彬³ , 葛秀国³ , 郭宏³ , 谢鑫¹ , 崔继红¹ , 李立文¹ , 陈富林¹

1西北大学生命科学学院, 西安, 710069;
2第四军医大学唐都医院妇产科, 西安, 710038;
3天津市农学院动物科学系, 天津, 300384;
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2012 年, 第 31卷, 第 82 篇   
收稿日期: 2012年07月28日    接受日期: 2012年10月26日

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为转基因牛提供过表达A-FABP的供核细胞。本研究从NCBI中查找牛脂肪型脂肪酸结合蛋白(Albert, A-FABP)基因全长cDNA序列，通过简并密码子的方法设计特异性引物。A-FABP基因通过公司合成，与pEGFP-C1载体连接形成重组质粒pEGFP-C1-A-FABP。分离获得3株秦川牛胎儿成纤维细胞(battle embryonic fibroblast, BEF)，分别用DMEM和D/F12进行培养，随机选择一株细胞优化外源基因转染条件。用优化的条件转染这3株细胞，800 μg/mL G-418进行筛选，挑取单克隆，获得稳定转染A-FABP的细胞株。PCR和RT-PCR检测细胞A-FABP基因的表达。结果显示，D/F12比DMEM能促进细胞的增殖(p<0.05)；细胞在高糖DMEM的转染效率显著高于D/F12 (p<0.05)；2株胎儿成纤维细胞(1雄1雌)获得5株稳定表达的细胞，其中4株来源于雌性细胞。结果证明细胞培养基, 性别和细胞系影响牛A-FABP转基因效率。

秦川牛；胎儿成纤维细胞；A-FABP；转基因