胡艳 , 宋迟 , 徐文娟 , 章双杰 , 李慧芳

作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2013 年, 第 32卷, 第 23 篇   
收稿日期: 2012年12月01日    接受日期: 2012年12月10日

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实时定量PCR技术(quantitative real-time PCR assay, rtQ-PCR)是一种快速检测核算水平方法。在多数相对定量法的运用过程中，会同时引入内参基因用以校正由于采样和操作误差所带来的样本之间核算总量的差别。一个理想的内参基因的表达水平必须维持在一个恒定的水平或至少不受实际试验条件和机体发育变化的影响。由于作为候选内参基因的看家基因也可能会随着试验条件改变呈现出发育性变化和/或差异表达，故在相关研究中，内参基因的选择就成为试验的关键和难点。本研究采用rtQ-PCR技术，以鸭胚胎期和出雏早期肝脏中IGF-Ⅰ mRNA表达的发育性变化检测为例，探讨涉及发育性变化的基因表达解析过程中内参基因的选择，并评估涉及发育性变化的基因表达特异性过程中绝对和相对定量两种解析方法的适用性。我们认为涉及发育性变化的基因表达解析过程中内参基因的选择时，采用2-ΔCt法对内参基因的有效性进行的组间评价，比Genorm等方法对内参基因的有效性进行的整体评价更为科学；涉及发育性变化的基因表达解析过程中，如果难以找到一个理想的内参基因时，绝对rtQ-PCR解析方法将比随意选取一种内参基因作为内标的相对rtQ-PCR解析方法更为简单和适用，结果的解析也更为直观和可靠。

基因表达；内参基因有效性；实时定量PCR适用性；鸭