刘卫 , 朱艳平 , 宁红梅 , 宝银梅 , 郭东光 , 鲁毅 , 王选年

作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2013 年, 第 32卷, 第 39 篇   
收稿日期: 1970年01月01日    接受日期: 1970年01月01日

[摘要] 目的 为获得猪瘟病毒（CSFV）NS2-3抗原集中区蛋白，建立CSFV抗体快速检测方法。方法 以CSFV全长基因组质粒为模板，PCR扩增NS2-3抗原表位集中区；扩增片段连接至克隆载体pMD18T-simple载体上，构建重组质粒pMD-NS_2-3-1；双酶切重组质粒pMD-NS_2-3-1和原核表达质粒pET-32a(+)，将目的基因连接至pET-32a(+)中，构建重组表达质粒，命名为pET32a-NS_2-3-1。重组表达质粒转化Rosetta（DE3）细胞，经IPTG在不同温度下诱导表达，并在不同诱导时间收集菌体。SDS-PAGE电泳和western-blot鉴定重组表达产物。结果 重组质粒pET32a-NS_2-3-1在28℃诱导5h得到高效表达，重组蛋白能够与兔抗CSFV阳性血清发生反应。 结论 获得CSFV NS2-3抗原集中区蛋白，并且获得的重组蛋白具有抗原性，能够作为CSFV抗体检测的抗原。

猪瘟病毒；NS2-3；抗原表位；原核表达；免疫印迹