密克¹ , 王金子¹ , 纪水养¹ , 陈琦¹ , 陈保善^1,2

1 广西大学生命科学与技术学院, 南宁, 530005；
2 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室, 南宁, 530005
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2013 年, 第 32卷, 第 17 篇   
收稿日期: 2012年11月20日    接受日期: 2012年12月03日

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用液氮冷冻研磨法破碎真菌菌丝细胞，通过差速和蔗糖密度梯度离心分离纯化板栗疫病菌线粒体，所得线粒体产率(质量比)约为1/104。电子显微镜观察和蛋白印迹表明，所制备的线粒体完整性好，没有检测到其它细胞成分的污染。使用膜蛋白裂解液溶解线粒体制备蛋白样品，将蛋白样品200 滋g 上样于pH 3~10，24 cm 的非线性胶条进行等电聚焦，电聚焦后再进行第二向SDS-PAGE 电泳分离，经银染获得重复性好、背景清晰、分辨率高((680依15)个蛋白质点)的凝胶图谱。随机选择10 个蛋白质点进行质谱分析，9 个获得有效注释，均为线粒体特异性蛋白质，实验结果表明所制备的蛋白样品非常适合双向电泳分析及其后续的质谱鉴定。

板栗疫病菌；线粒体； 双向电泳