方攀 , 张运城 , 袁虎威 , 刘玉林 , 李伟

林木育种国家工程实验室, 北京林业大学生物科学与技术学院, 北京, 100083
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2013 年, 第 32卷, 第 56 篇   
收稿日期: 2013年03月19日    接受日期: 2013年03月29日

为了研究樟子松遗传结构多样性，本研究对樟子松SSR反应体系进行优化。首先从模板DNA、Taq酶含量、dNTP浓度、引物浓度，退火温度，循环次数6个方面，分别设置单因素多水平试验，观察条带的亮度及清晰度，以确定合适的反应体系。然后利用L₁₆(4⁵)正交试验，对DNA模板浓度、Taq酶含量、dNTP浓度、引物浓度这4个因素在4个水平上做进一步优化。建立了樟子松SSR最佳反应体系：25μL的反应体系中包含模板DNA 50ng，Taq酶1.0U，dNTP 0.3mmol/L，引物0.15μmol/L，10×Taq Buffer（含Mg²⁺）2.5μL。樟子松SSR反应体系的优化，有助于对樟子松SSR分子标记的开发，为分析樟子松天然群体和人工群体的遗传结构多样性，构建遗传图谱和定位功能基因奠定了基础。

樟子松；SSR 反应体系； 正交试验