王影影¹ , 齐兴梅³ , 刘涛² , 祁静² , 张春² , 郭玲玲¹

1 苏州大学基础医学与生物科学学院, 苏州, 215006
2 苏州分子诊断和治疗技术重点实验室，中国科学院苏州生物医学工程技术研究所, 苏州, 215163
3 苏州大学生命科学学院, 苏州, 215006
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2013 年, 第 32卷, 第 107 篇   
收稿日期: 2013年06月12日    接受日期: 2013年07月05日

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      鲎C因子是鲎血细胞中一种对内毒素具有高亲和力的丝氨酸蛋白酶原，可替代鲎试剂用于内毒素检测。鲎C因子N 端CES片段中的sushi区域是与内毒素结合的关键部位。本研究在sushi结构域中的特定位点断开CES与内毒素结合的功能片段，然后分别和蛋白质内含肽Ssp DnaX的N端片段(IN)和C端片段(IC)连接，并在大肠杆菌中表达，表达产物经亲和层析纯化，复性以及内毒素去除后，利用蛋白质反式剪接系统，在体外诱导该蛋白质内含肽发生剪接，重新得到C因子的CES蛋白，并检测其活性。实验结果表明此重组CES蛋白具有结合内毒素活性，提示在大肠杆菌系统中开发低成本内毒素检测试剂的可行性。

反式剪接；内含肽；东方鲎C因子；内毒素；荧光检测