李飞^1,2 , 许厚强² , 陈伟² , 陈祥² , 刘敏^1,2 , 桓聪聪²

1 贵州大学生命科学学院, 贵阳, 550025
2 高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室，贵州大学动物科学学院, 贵阳, 550025
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2013 年, 第 32卷, 第 74 篇   
收稿日期: 2013年04月09日    接受日期: 2013年04月23日

为了克隆关岭牛MyoDⅠ基因启动子并验证其启动活性， 根据GenBank中牛的MyoDⅠ基因序列设计PCR引物，用 PCR技术扩增牛MyoDⅠ基因的启动子，构建重组克隆载体pUCmT-MyoDⅠ；并通过PCR扩增、限制性酶切、测序及生物信息学分析对阳性克隆进行鉴定；构建报告质粒pGL3-MyoDⅠ，并将其转染小鼠C2C12、3T3-L1细胞系，检测其24h后的双荧光素酶活性。实验结果获得了关岭牛MyoDⅠ基因启动子，其序列长度为993bp，并成功构建了MyoDⅠ启动子报告质粒；双荧光素酶活性检测表明pGL3-MyoDⅠ在小鼠C2C12细胞中的表达是pGL3空载体40.65倍，在小鼠3T3-L1细胞中的表达是空载体的1.13倍，MyoDⅠ启动子在小鼠C2C12细胞中的表达高于3T3-L1细胞(**P<0.01)。结果表明关岭牛MyoDⅠ基因启动子具有启动活性，在小鼠骨骼肌细胞中特异性表达。

MyoDⅠ基因；启动子；荧光素酶；C2C12；3T3-L1