李宗艳¹ , 李静¹ , 郭荣² , 秦艳玲¹

1 西南林业大学园林学院，昆明，650224
2 西南林业大学基础部，昆明，650224
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2014 年, 第 33卷, 第 4 篇   
收稿日期: 2013年08月06日    接受日期: 2013年09月11日

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摘要：采用CTAB法对硬叶兜兰叶片总DNA进行提取，通过正交实验设计，用SRAP正向引物me1（5'-TGAGTCCAAACCGGATA-3'）和反向引物em2 (5'-ACACACACACACACACT-3')对反应体系进行优化；并应用其进行种群遗传差异分析。结果表明：优化的20µl的PCR反应体系中DNA模板为90ng，Taq DNA聚合酶1.6 U， dNTPs 0.30 mmol·L^-1，Mgcl₂ 2.0mmol/L 和引物各0.50 µmol·L^-1，经重复电泳和银染，验证适合进行硬叶兜兰的SRAP分析；利用该体系对7个不同种源的167份硬叶兜兰进行SRAP-PCR扩增，对筛选的10个引物扩增，共得到288条条带，其中多样性条带234条，多态位点百分率（PPB）为81.25%；种群的遗传距离值在0.0659-0.1916，UPGMA聚类结果显示供试种群在遗传相似度为0.863时，可以分为2支，即第一分支由马固、斗咀和杨柳井居群组成，第二支由古林箐、夹寒箐、小坝子和田坝居群组成。SRAP标记可用较好地适用于硬叶兜兰种群遗传差异的鉴定。

硬叶兜兰；SRAP-PCR反应体系；遗传变异；亲缘关系