孟凡丽 , 陈自洪 , 陆凤花 , 刘庆友 , 罗婵 , 张顺 , 王丹 , 石德顺

广西大学亚热带生物资源保护利用国家重点实验室, 南宁, 530004
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2014 年, 第 33卷, 第 42 篇   
收稿日期: 1970年01月01日    接受日期: 1970年01月01日

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采用牛体外成熟卵母细胞和冷冻解冻的精子为材料，以pEGFP-N1为模式基因，探讨DNA浓度、精子质膜破损方法、注射台温度对牛精子胞质内注射(ICSI)介导转基因效果的影响。结果表明：线性pEGFP-N1质粒DNA浓度为5 μg/mL、10 μg/mL两组的早期胚胎发育率显著高于50 μg/mL组（19.8%，16.7% VS 7.9%，p<0.05）。以冻融、TritonX100、超声波断尾三种方法破损精子质膜，冻融组的囊胚发育率（24.7%）最高，且冻融组的早期胚胎基因表达率极显著高于超声断尾组（41%VS20.5%，P<0.01）；当分别在25℃、38℃的注射台进行显微注射时，两组之间胚胎的囊胚率无显著差异（p>0.05），但二者之间胚胎的基因表达率差异显著（46.83%VS 28.57%，p<0.05）。以上结果表明：(1)牛精子转染外源GFP基因的浓度不宜过高，转染高浓度的DNA会影响胚胎发育；(2)精子质膜是阻碍外源DNA与牛精子相结合的主要因素，将精子冻融处理可有效破损其质膜，利于精子与外源DNA的结合，从而提高ICSI介导转基因效率；(3) 25℃和38℃热台温度对牛ICSI胚胎的早期发育无影响，但25℃热台温度可提高牛ICSI介导转基因的效果。                                             

 

牛； ICSI 介导转基因； 转基因胚胎