阴沟肠杆菌B29菌株脂多糖合成基因（waaL、waaG）缺失突变株的构建及分析

王金星; 费娜; 王睿瑞; 吴国军; 张梦晖; 赵立平; 张晓君

阴沟肠杆菌B29菌株脂多糖合成基因（waaL、waaG）缺失突变株的构建及分析

王金星

, 费娜

, 王睿瑞

, 吴国军

, 张梦晖

, 赵立平

, 张晓君

上海交通大学生命科学技术学院, 微生物代谢国家重点实验室, 上海, 200240

作者

通讯作者
基因组学与应用生物学, 2014 年, 第 33卷, 第 22 篇
收稿日期: 2013年12月10日接受日期: 2014年01月13日

摘要

脂多糖(LPS)在革兰氏阴性细菌中的功能作用在不同菌株中已有研究，但尚未有对肠杆菌属LPS结构与功能的报道。本研究试图构建能引起肥胖的阴沟肠杆菌B29 菌株waaL 和waaG 基因的缺失突变株，以了解突变体菌株产生的LPS 结构与活性与野生菌株产生的LPS 的差异。根据同源重组技术原理，利用广宿主自杀性质粒构建成敲除载体pKNG101驻waaL 和pKNG101驻waaG，转化E. coli SM10 菌株，并与B29 菌株进行双亲杂交，再以抗生素和蔗糖筛选条件筛选waaL 和waaG 基因缺失突变株；利用多重PCR、ERICPCR、PCR-DGGE、DNA 测序结果均证实突变株B29驻waaL 和B29驻waaG 构建成功；最后，对野生菌株B29与两个突变株生物学特性的差异进行了比较。银染实验结果表明野生型B29 菌株的脂多糖为光滑型结构，突变株的LPS 结构明显缺失O 抗原，B29驻waaG 突变株同时还缺失了外部核心部分；用鲎试剂法检测LPS的内毒素活性显示，突变株的内毒素活性与野生型相比有较大幅度下降；B29驻waaL 突变株的生长速率与野生型相当，而B29驻waaG 突变株的生长速率则相对降低。本研究成功构建两种内毒素活性下降的突变株，为下一步利用突变株研究B29 菌株在肥胖发生中的机制奠定基础。

关键词

阴沟肠杆菌；脂多糖；waaL 基因； waaG 基因；内毒素活性

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基因组学与应用生物学

• 第 33 卷

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