王春燕 , 崔恒进 , 胡君 , 谢桂琴 , 张焕相

苏州大学基础医学与生物科学学院，江苏省干细胞研究重点实验室，苏州，215123
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2013 年, 第 32卷, 第 115 篇   
收稿日期: 2013年08月06日    接受日期: 2013年08月30日

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Dvl1及其结构缺失突变体ΔDIX (Dsh and Axin)和ΔDEP (Dsh, Egl-10 and Pleckstrin)腺病毒载体的构建并验证其在MSCs (Mesenchymal Stem Cells)中的表达情况。将目的基因定向克隆至pAdTrack-CMV穿梭载体上，并经PmeⅠ线性化后在BJ5183细菌中与pAdEasy-1骨架质粒同源重组，获得重组腺病毒载体，在QBI-293A细胞中包装及扩增，实时荧光定量PCR和Western bolt验证Dvl1在MSCs中的表达情况。经PCR、PacⅠ单酶切鉴定及测序分析，成功构建Ad-Dvl1、Ad-ΔDIX和Ad-ΔDEP腺病毒载体，目的基因序列与GENEBANK报道一致，并选出150 MOI为最适感染MSCs的感染复数，成功构建了Ad-Dvl1、Ad-ΔDIX和Ad-ΔDEP腺病毒载体，并获得高滴度的病毒子，qPCR和Western blot证实Dvl1在MSCs中高表达并增加了β-catenin在细胞中的累积，为进一步研究Dvl1在MSCs迁移过程的作用奠定了基础。

间充质干细胞；腺病毒载体； Dvl1