唐建民^1,2 , 陈宗游^2,3 , 韦霄² , 史艳财² , 柴胜丰² , 孔德鑫²

1 广西师范大学生命科学院, 桂林, 541004; 2 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所, 桂林, 541006; 3 广西大学农学院, 南宁, 530004
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基因组学与应用生物学, 2014 年, 第 33卷, 第 46 篇   
收稿日期: 2013年10月30日    接受日期: 2013年12月04日

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采用L₁₆(4⁵)正交设计试验对东兴金花茶SSR-PCR反应的五因素（Mg²⁺、dNTPs、引物、Taq酶和模板DNA浓度）四水平进行了优化，并通过梯度PCR确定最佳循环次数和退火温度，最终确定东兴金花茶最佳反应体系（15μL）及扩增条件为：Mg²⁺1.50mmol/L、dNTP 0.30mmol/L、引物0.40 μmol/L、Taq酶0.7 5U、模板DNA 40.00 ng；最佳扩增程序为：94℃ 预变性5 min；94℃变性30s，58℃退火30s(因引物而异，该温度为引物CN10的退火温度)，72℃延伸40s，共36个循环；72℃最后延伸10 min。采用优化后的SSR-PCR体系及扩增条件,将已公布的31对同属植物SSR引物（4对茶树、7对山茶和20对金花茶引物）运用于东兴金花茶扩增，结果表明山茶属的不同植物之间可以共享部分SSR引物信息，东兴金花茶获得了9对能扩增出条带清晰且具有多态性的引物，引物最适退货温度为54～60℃,观测杂合度（H_O）和期望杂合度(H_E)分别为0.433～1.000和0.391～0.932。

东兴金花茶； SSR-PCR； 体系优化；引物筛选