张卓 , 陈平华 , 许莉萍 , 陈忠伟 , 施桂姣 , 王恒波 , 邰连赛 , 项慰 , 高三基 , 刘迪 , 陈容 , 陈如凯

福建农林大学农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室, 农业部甘蔗及制品质量监督检验测试中心转基因检测室,福州, 350002
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2014 年, 第 33卷, 第 80 篇   
收稿日期: 2014年03月03日    接受日期: 2014年04月22日

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收集Genbank数据库及有关文献发表的甘蔗ScMV-CP基因、ScYLV-CP基因全序列，利用BLAST比对获得保守序列，并在两个保守序列两端设计内切酶位点，通过生物合成和酶切连接，获得全长687 bp的两个保守序列融合片段（MYCP）。根据添加在MYCP序列两端的内切酶位点将其以正向和反向方式插入中间载体pHANNIBAL上，形成双价病毒干扰结构，再将其表达框和本实验室保存的Cry1AC基因表达框一起插入到添加Sma I内切酶位点的中间载体pHANNIBAL-Z上，利用NotⅠ酶切，回收双价病毒干扰结构和Cry1AC基因表达框片段，连接到添加Bar基因表达框的干扰表达载体pART27-Z上，构建了抗病虫和除草剂四价植物表达载体。采用基因枪法将构建好的四价植物表达载体转入甘蔗（Saccharum Complex)品种FN15的胚性愈伤组织中，通过PPT筛选获得抗性再生甘蔗植株，经过PCR、半定量、定量以及Bt蛋白试纸检测，获得同时整合四种目的基因并表达的四价转基因甘蔗植株。

ScMV-CP基因；ScYLV-CP基因；Cry1Ac基因；Bar基因；转基因甘蔗