陈淑萍¹ , 周红桃³ , 蔡俊宏² , 王福利² , 许茂轩¹ , 符生苗²

1 海南大学农学院, 海口, 570228; 2 海南省人民医院医学检验中心, 海口, 570311; 3 南方医科大学珠江医院医学检验中心, 广州, 510280
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基因组学与应用生物学, 2014 年, 第 33卷, 第 62 篇   
收稿日期: 1970年01月01日    接受日期: 1970年01月01日

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为了构建具有干扰效应的靶向Survivin和CDK1基因及两者串联的短发夹样RNA(short hairpin RNA，shRNA)表达载体，并研究其靶向干扰对鼻咽癌细胞CNE-2生物学行为的改变。本研究通过构建pU6-Survivin_shRNA、pU6-CDK1_shRNA和pU6-Survivin_shRNA-CDK1_shRNA重组载体，用脂质体Lipofectamine 2000法将其转染入CNE-2细胞株中，应用RT-PCR方法初步筛选具有干扰效应的重组载体，逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Survivin、CDK1 mRNA的基因表达水平，Western blot 检测Survivin和CDK1蛋白表达以及MTT法检测癌细胞增殖活性的变化。结果表明：成功构建具有干扰效应的shRNAs表达载体；联合或单基因Survivin、CDK1的shRNAs表达载体干扰CNE-2细胞后，其对应的mRNA和目的蛋白表达均降低，CNE-2癌细胞增殖活性降低，联合基因shRNAs表达载体具有一定程度的干扰增强作用。

短发夹样RNA；Survivin 基因；CDK1 基因；鼻咽癌；CNE-2