王春燕 , 崔恒进 , 胡君 , 谢桂琴 , 张焕相

苏州大学基础医学与生物科学学院, 江苏省干细胞研究重点实验室, 苏州, 215123
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2014 年, 第 33卷, 第 64 篇   
收稿日期: 1970年01月01日    接受日期: 1970年01月01日

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Dvl1 及其结构缺失突变体驻DIX (dsh and axin)和驻DEP (dsh, Egl-10 and pleckstrin)腺病毒载体的构建并验证其在MSCs (mesenchymal stem cells)中的表达情况。将目的基因定向克隆至pAdTrack-CMV 穿梭载体上，并经Pme玉线性化后在BJ5183 细菌中与pAdEasy-1 骨架质粒同源重组，获得重组腺病毒载体，在QBI-293A 细胞中包装及扩增，实时荧光定量PCR 和Western bolt 验证Dvl1 在MSCs 中的表达情况。经PCR、Pac玉单酶切鉴定及测序分析，成功构建Ad-Dvl1、Ad-驻DIX 和Ad-驻DEP 腺病毒载体，目的基因序列与GenBank 报道一致，并选出150 MOI 为最适感染MSCs 的感染复数，成功构建了Ad-Dvl1、Ad-驻DIX 和Ad-驻DEP 腺病毒载体，并获得高滴度的病毒子，qPCR 和Western blot 证实Dvl1 在MSCs 中高表达并增加了茁-catenin 在细胞中的累积，为进一步研究Dvl1 在MSCs 迁移过程的作用奠定了基础。

间充质干细胞；腺病毒载体；Dvl1