潘家茂¹ , 蓝健益¹ , 郑小群¹ , 秦秀林^1,2 , 冯家勋^1,2 , 刘君梁^1,2

1 广西大学生命科学与技术学院,南宁,530005
2 广西亚热带生物资源保护利用重点实验室,南宁,530005
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2014 年, 第 33卷, 第 111 篇   
收稿日期: 2014年05月07日    接受日期: 2014年07月09日

这是一篇采用Creative Commons Attribution License进行授权的开放取阅论文。只要对本原作有恰当的引用，版权所有人允许和同意第三方无条件的使用与传播。

本研究通过根癌农杆菌介导转化法，构建丝状真菌绿色木霉HP35-3 的遗传转化表达体系，并以红
色荧光蛋白基因(DsRed2)为报告基因来验证本表达体系。首先构建含有潮霉素抗性基因(HygR)、磷酸甘油醛
脱氢酶启动子(Pgpd)和红色荧光蛋白基因(DsRed2)的双元载体pCAMT-CPRFP。然后将该双元载体转化到根
癌农杆菌EHA105 中，并筛选阳性转化子。将该转化子和绿色木霉HP35-3 分生孢子进行液体共培养，并在
含有150 滋g/mL 潮霉素抗性平板上筛选出绿色木霉HP35-3RFP 阳性转化子。最后分别通过如下三种方法
检测：提取HP35-3RFP 的总DNA 进行PCR 验证；对菌丝体进行荧光显微镜观察；对菌丝体提取物进行荧
光酶标仪检测。结果表明：获得的转化子能够稳定遗传，外源红色荧光蛋白基因整合到木霉HP35-3 的基因
组中并成功表达。

根癌农杆菌；丝状真菌；红色荧光蛋白