罗婵 , 阮秋燕 , 雷钏 , 徐永茹 , 陆凤花 , 蒋建荣 , 石德顺

亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室, 广西大学动物繁殖研究所, 南宁, 530004
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2014 年, 第 33卷, 第 150 篇   
收稿日期: 2014年07月30日    接受日期: 2014年09月28日

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本研究旨在获得一种高效转染水牛细胞的方法。本研究首先以水牛胎儿成纤维细胞(BFF)为研究对象，建立、优化核转染法；随后，比较核转染法、脂质体法、电穿孔法转染BFF的效率；最后选用较优的方法，探讨转染水牛原代骨髓间充质干细胞和类胚胎干细胞的可行性。结果发现随电压的增加，核转染BFF的效率升高；核转染电压为225 V，脉冲时间为10 ms时，细胞EGFP阳性率为(83.1±1.4)%，转染效率显著高于脂质体法((11.7±1.2)%)和电穿孔法((35.5±2.0)%)。运用优化的核转染条件可以成功将外源基因导入水牛原代骨髓间充质干细胞和类胚胎干细胞，且不影响其细胞生物学特性。本研究为以多能干细胞介导的水牛转基因克隆胚胎的生产奠定了基础。

核转染；转染效率；水牛胎儿成纤维细胞；骨髓间充质干细胞；类胚胎干细胞